有机磷农药是农药中极为重要的一类化合物，广泛作用于防治农作物病虫害，其品种繁多、高效广谱、易分解，多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类化合物^[1]，对生物体具有一定的毒性，对人、畜毒性较大，因此环境中有机磷农药的污染和危害已日益引起人们的广泛关注。有机磷农药的测定可采用气相色谱-火焰光度法、气相色谱-氮磷法和气相色谱-质谱法等^[2-3]，土壤样品的前处理方法主要有索氏提取、自动索氏提取、加速溶剂提取、超声提取等^[4-5]。由于土壤有机物成分复杂，在提取过程中，除了有机磷农药，其他有机污染物也会被提取出来，因此需要在分析前对样品进行净化从而消除干扰，常用的净化方法有柱层析法、固相小柱法和凝胶色谱法等^[6]。商品化的固相净化柱使用简便、性能稳定、结果重现性好，是土壤有机磷分析中较为普遍的净化方法^[7]。目前常用的净化小柱有硅胶小柱、弗罗里硅土小柱，C18柱、Al₂O₃柱等。

现采用索氏提取、硅胶小柱净化、气相色谱法测定土壤中37种有机磷农药，主要包括敌敌畏、甲胺磷、速灭磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、治螟磷、特丁硫磷、二嗪磷、异稻瘟净、乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷等常见的有机磷农药。

1 实验部分 1.1 仪器与试剂

仪器：Agilent 7890 A气相色谱仪，配有火焰光度检测器(美国安捷伦公司)；ASE 350加速溶剂萃取仪(美国戴安公司)；LANYI-650 Y超声波提取仪(上海兰仪实业有限公司)；GPC ULTRA 10836凝胶渗透色谱仪(德国LCtech公司)；Hei-VAP旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)；DC-12氮吹浓缩仪(上海安谱实验科技股份有限公司)。DB-1701石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm，内涂14%氰丙基-苯基甲基聚硅氧烷)，DB-5石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm，内涂5%苯甲基聚硅氧烷)，硅胶小柱(1 g/6 mL)，均购自美国安捷伦公司。

试剂：二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯(均为农残级，上海安谱实验科技股份有限公司)；无水硫酸钠(分析纯，泰州市恒泰玻化有限公司)；37种有机磷混合标准溶液(定制，ρ=1 000 mg/L，溶剂为正己烷，美国Accstandard公司)。

1.2 试剂配制

37种有机磷混合标准使用液的配制：量取适量的有机磷混合标准溶液，用正己烷稀释配制成质量浓度为100 mg/L的标准使用液。有机磷标准系列溶液的配制：量取适量的有机磷混合标准使用液，用正己烷稀释，配制成质量浓度为0.500，1.00，2.00，5.00和10.0 mg/L的系列标准溶液。

1.3 样品采集与保存

样品应采集于预先洗净烘干的棕色玻璃瓶内，避光于4 ℃以下冷藏保存，保存时间为7 d。样品提取溶液应避光于4 ℃以下冷藏保存，在40 d内分析完毕。

1.4 样品的前处理 1.4.1 试样的制备

称取10 g左右的土壤样品，加入5~20 g无水硫酸钠研磨均匀，通过索氏提取装置，以200 mL正己烷-丙酮(V/V=1:1)萃取18~24 h。

1.4.2 固相柱净化

依次用5 mL乙酸乙酯和15 mL正己烷活化硅胶小柱，弃去流出液。将萃取浓缩液移入硅胶小柱，再以5 mL正己烷淋洗，弃去流出液。最后用10 mL正己烷-乙酸乙酯(V/V=9:1)为溶剂洗脱，洗脱液于浓缩管中定容至1 mL，待色谱分析。

1.5 气相色谱分析条件

进样方式：分流进样；分流比：10:1；进样口温度：250 ℃；检测器温度：240 ℃；色谱柱流量：1.0 mL/min；氢气流量：75 mL/min；空气流量：100 mL/min；尾吹氮气流量：60 mL/min；进样量：1.0 μL。程序升温：初始温度60 ℃，以5 ℃/min速度升温至150 ℃(保持5 min)，以5 ℃/min速度升温至190 ℃(保持5 min)，以5 ℃/min速度升温至220 ℃(保持5 min)，以5 ℃/min速度升温至260 ℃(保持10 min)。

2 结果与讨论 2.1 标准色谱图

37种有机磷农药在色谱柱DB-1701上的标准色谱图见图 1，结果表明，大部分有机磷农药在色谱柱DB-1701上的分离效果较好，特丁硫磷、二嗪磷、赛灭磷、益棉磷等物质分离效果略差于其他有机磷农药，但也能够满足有机磷农药监测分析的要求。如果目标化合物有检出，可用色谱柱DB-5辅助定性予以确认。

2.2 样品提取方式对比

向10 g石英砂中加入20 μL质量浓度为100 mg/L的有机磷农药混合标准使用液，分别用索氏提取、加速溶剂萃取、超声波提取3种方式提取土壤中的有机磷农药，分析对比提取效率，结果见表 1(序号对应的化合物名称同图 1，表 2—4同)。由表 1可见，索氏提取的加标回收率为71.4%~95.7%，加速溶剂萃取的加标回收率为65.3%~92.3%，超声波提取的加标回收率为62.8%~88.2%。对比可知，土壤中的37种有机磷农药用索氏提取的效率最高(均＞70%)，因此选用索氏提取法来提取土壤中的有机磷农药。

2.3 样品净化方式对比

称取10 g土壤样品，经索氏提取后，向萃取浓缩液中加入20 μL质量浓度为100 mg/L的有机磷农药混合标准使用液，分别用硅胶小柱和凝胶色谱净化，分析对比其回收率，结果见表 2。由表 2可见，固相萃取小柱净化土壤中有机磷农药的回收率范围为86.0%~102%，凝胶色谱净化土壤中有机磷农药的回收率范围为78.0%~93.8%，固相萃取小柱的净化效果优于凝胶色谱净化，因此选用固相萃取小柱作为土壤中有机磷农药的净化方法。

2.4 检出限

选择预计方法检出限2~5倍响应值所对应浓度的样品进行重复平行测定7次，计算测定结果的标准偏差，按照公式MDL=t_{(n-1, 0.99)}×S计算方法检出限(t为自由度为n-1，置信度为0.99时的t分布；n为样品的平行测定次数；S为n次平行测定的标准偏差)。实验以石英砂为空白基体，加入37种有机磷农药混合标准溶液，配制7个质量比为0.030 mg/kg的空白加标样品，经提取和浓缩后上机测定，计算得出各化合物组分的方法检出限，结果见表 3。由表 3可见，有机磷农药方法检出限为0.002~0.015 mg/kg，测定下限为0.008~0.060 mg/kg(4倍方法检出限)。

2.5 精密度和准确度

称取10 g实际土壤样品，分别加入37种有机磷混合标准溶液，制成低、中、高3种不同质量比(0.05，0.20和1.00 mg/kg)的土壤样品。经提取浓缩后，平行测定6次，分别计算其加标回收率和相对标准偏差，结果见表 4。由表 4可知，0.05 mg/kg土壤样品中37种有机磷农药的加标回收率为72.8%~104%，相对标准偏差为4.2%~13.8%；0.20 mg/kg土壤样品中37种有机磷农药的加标回收率为71.5%~101%，相对标准偏差为4.3%~13.5%；1.00 mg/kg土壤样品中37种有机磷农药的加标回收率为74.6%~109%，相对标准偏差为6.8%~14.6%。3种土壤样品都有较好的精密度和准确度，说明该方法的可操作性较强。

3 结语

通过实验建立了索氏提取-硅胶小柱净化-气相色谱法测定土壤中37种有机磷农药的方法，方法检出限为0.002~0.015 mg/kg，测定下限为0.008~0.060 mg/kg。0.05 mg/kg加标样品中有机磷农药的加标回收率为72.8%~104%，相对标准偏差为4.2%~13.8%；0.20 mg/kg加标样品中有机磷农药的加标回收率为71.5%~101%，相对标准偏差为4.3%~13.5%；1.00 mg/kg加标样品中有机磷农药的加标回收率为74.6%~109%，相对标准偏差为6.8%~14.6%。该方法分离效果好、灵敏度高、重现性好，通过对实际土壤加标样品的测定，说明该方法准确可靠，能够满足土壤中37种有机磷农药残留检测的要求。